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1、在正式试验过程中，应分别采用阳性对照和阴性对照控制试验条件，并将试验样品一式两份，以确保试验结果的准确性。有时背景较高，表明存在非特异性反应，可以用羊血清、兔血清或BSA阻断。

2.在ELISA中，各种实验条件的选择非常重要，包括：

（1） 固体载体的选择：许多物质可用作固体载体，如PVC、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺和纤维素。形式可以是凹板、试管、珠等，目前常用的是40孔聚苯乙烯凹板。无论是哪种载体，都可以在使用前进行筛选：用相同量的抗原包被，在相同的实验条件下反应，观察其颜色反应是否均匀，判断其吸附性能是否良好。

（2） 涂层抗体（或抗原）的选择：当抗体（或抗体）吸附在固体载体表面时，要求纯度良好，PH值通常要求在9.0至9.6之间。吸附温度、时间和蛋白质含量也有一定影响，一般为4℃18-24小时。需要滴定蛋白质涂层的适当浓度：不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μG/ml等），在其他测试条件相同的情况下观察阳性样品的OD值。选择OD值高、蛋白质含量低的浓度。大多数蛋白质通常为1～10μg/ml。

（3） 酶标抗体工作浓度的选择：首先，用直接ELISA滴定初始滴度（见酶标抗体部分）。然后固定其他条件或使用“方阵法”（涂层的不同稀释度、待测样品的参考物和酶标记抗体）在正式实验系统中准确滴定其工作浓度。

（4） 酶底物和供氢体的选择：供氢体选择的要求便宜、安全、显色反应明显，但无色。一些氢供体（如OPD等）具有潜在的致癌作用，应予以保护。合格者应使用非致癌和敏感的氢供体，如TMB和ABTS，这些供体目前相对令人满意。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱终止反应。通常，基材作用时间为10-30分钟。